一、 儀器介紹

實驗（yàn）目的：

本試驗檢測受試物是否引起培養的哺乳動物細胞染（rǎn）色體畸變,以評（píng）價受試物致突變的可能性

實驗概述：

在加（jiā）入和不加入代謝活化係統的條件下,使（shǐ）培養的哺乳（rǔ）動物細胞（bāo）暴露於受試物中。用中期分裂相阻斷劑（如秋水仙素或秋水仙胺）處理,使細胞停止在中期分（fèn）裂相（xiàng）,隨後收獲（huò）細胞,製片,染色,分析染色（sè）體畸變。

大部分的致突變劑導致染色單體型畸變,偶有染色體型畸變發（fā）生。雖然多倍體的增加（jiā）可（kě）能預示著有染（rǎn）色體數目畸變的可能,但本方法並不適（shì）合用（yòng）於測（cè）定染色體的（de）數目畸變。

應用範圍

應用於科（kē）研、農業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入（rù）顆粒染毒效果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農藥登記毒理學試驗方法第19部分（fèn）:體外哺乳動物細胞染色體

畸變試驗（yàn）》

二、試驗流（liú）程

1）細胞培養（yǎng）

選（xuǎn）擇合適細（xì）胞係，在含血清培養基（jī）中培養至對（duì）數生長（zhǎng）期。

2）受試物處（chù）理

設置多個濃度組（需包括細胞毒性評估，如50%生長抑製濃度）

陽性對照（如絲裂黴素（sù）C、環磷酰胺等已知誘（yòu）變劑）

陰性對照（溶劑對照）

3.）代謝活化（huà）係（xì）統（S9混合液）

模擬體內代謝，用於檢（jiǎn）測需代謝激活的致突變物（如加Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）

4.）采樣時間

短期處（chù）理:1個細胞周期（通常（cháng）24小時，含或（huò）不含S9）

長期處理:覆蓋多個細胞周期（如48小（xiǎo）時（shí））

5）染色體製備

秋水仙素（或秋水仙胺）處理（lǐ）:阻斷（duàn）中期細（xì）胞。

低滲處（chù）理（KCI溶液）使細胞膨脹。

固定（甲醇:冰醋（cù）酸=3:1）後（hòu）滴片，Giemsa染色（sè）。

6）鏡檢分析

顯微鏡（jìng）下觀察至少200個中期分裂相，記錄畸變類型和頻率。

三、儀器與試劑

關鍵儀器：

培養箱、生物安全櫃、離心機、顯微鏡（配備油鏡和圖像分析係（xì）統）

染色體自動掃描儀（yí）（可選）

主要試（shì）劑:

細胞培養（yǎng）基、胎牛（niú）血清、胰蛋白酶（méi）。

秋水仙（xiān）素（sù）、Giemsa染液、S9混合液。