一、 儀器介紹

實驗目的：

確定（dìng）重複（fù）接（jiē）觸受試物對哺乳動物是否可引起皮膚變（biàn）態反應及其程度

試驗概述：  

部（bù）封閉塗皮試驗（Buehler test，BT）和豚鼠值試驗（uinea pig maximisation test，GPMT）是實驗動物通過多次皮膚塗抹（誘導接觸）或皮（pí）內注（zhù）射（shè）受試物10d~14d（誘導階段）後,給予激發（fā）劑量的受試物,觀察實驗動物,並與對照動物比較對（duì）激發接觸受試物的皮膚反應強度。

小鼠部淋巴結分析試驗（locallymph node assay，LLNA）是通過耳部（bù）給予實驗動物受試物,引起淋巴（bā）結的淋巴（bā）細胞增生,淋巴細胞增生與受試物劑量（過敏程度）成比例。利（lì）用放（fàng）射（shè）性標記方法,測定試驗組（zǔ）與對照組淋巴細胞的標記率,並進行對比,獲得刺激指數,評價致敏強度。

應用範圍

應用於（yú）科研、農業、衛生、教育、霧霾（mái）狀態可吸入顆粒染（rǎn）毒（dú）效果研究等各個領域

符（fú）合標準：

GB/T 15670.9-2017《農藥登記毒理學試驗方（fāng）法第（dì）9部分皮膚變態反應（致敏）試驗》

二、試驗步驟:

1. Buehler Test（BT） 

動物模型:豚鼠

操作（zuò）步驟（zhòu）:

誘導階段:通過封閉式皮膚塗抹受試物，持續10-14天。激發階段:間隔後再次塗抹受試物，觀察皮膚反應。

觀察指標:紅斑、水（shuǐ）腫等皮膚炎症反應的強度(主觀（guān）評分)

優點:

模擬人類皮膚接觸（chù）途徑，適用於部製劑(如化妝品、外用藥物)

無需注射，操作相對溫和。0

缺點:

敏（mǐn）感性較低，可能（néng）漏檢弱致敏物，。依賴主觀評分，存在實驗者偏差。0應用場景:傳統化（huà）妝品、外用（yòng）藥品的（de）安全性評估。

2.豚鼠值試驗（GPMT）

動物模型:豚鼠

操作步驟（zhòu）:

誘（yòu）導階段:皮內注（zhù）射受試物（常聯合弗（fú）氏完全（quán）佐劑）結合（hé）皮膚塗抹，持續10-14天（tiān）。

激發（fā）階段（duàn）:再次塗抹受試物，評估皮（pí）膚反應。

觀察指標:與BT類似，但反應更強烈(紅斑（bān）、水腫、硬結（jié）)

優點（diǎn）:

敏感性高，可檢測強（qiáng）致敏物和弱（ruò）致敏（mǐn）物;

國際的“金標準”，尤其適用於化學（xué）品和工業原料。

缺點（diǎn）:

使用佐劑可能引發過度免疫反應，導致假陽性;

動物痛苦（kǔ）程度較高，倫理爭議較大。

應用場景:工業化學品、強致敏性物質（zhì）(如染發劑（jì）、橡膠添加劑)的嚴格檢測。

3.小鼠部淋巴結試驗（LLNA）

動物模型:小鼠.

操作步驟:

誘導階段:連續3天耳部塗抹受（shòu）試物（wù）。

檢測指標:通過3H-胸苷或（huò）BrdU標記增殖的淋巴（bā）細胞，計算刺激指數（SI）觀察指標:淋巴結淋巴細胞增殖程度（SI>3判為陽性）

優點:

客觀定量:減少主觀評分誤（wù）差（chà）；

符合3R原則:動物用量少，無需激發階（jiē）段，痛苦小;

高效快速:試（shì）驗周期（qī）短(約1周)。

缺（quē）點:

對某些物質(如金（jīn）屬鹽)敏感性不（bú）足，需使用放（fàng）射性物（wù）質或特殊設備，成本較高（gāo）。

應用場景:歐盟（méng）等法規優先的替代方（fāng）法，廣泛用於藥品、化（huà）妝品及化工產品的初篩。