一（yī）、 儀器介紹

實驗目的：

本（běn）試驗用於檢測受試物對體（tǐ）外培養（yǎng）的哺（bǔ）乳動物細胞的基因突變作用（yòng）,包括堿基對突變、移碼突變和缺失等,從而評價受試物引起突變的（de）可能性

實驗（yàn）概述：

本試驗屬正（zhèng）向突變試驗（yàn）,可檢出堿基（jī）置換型致突變物和移碼（mǎ）型（xíng）致突變物。在加入和不加入代謝活化係統的條（tiáo）件下,使細胞暴露於（yú）受試物一定時間,然（rán）後將細胞（bāo）傳代培養。胸苷激酶水平正常的細胞對三氟胸苷（trifluorothymidine,TFT）等敏感,因而在培養液中不能生長（zhǎng）分裂,突變細（xì）胞則不敏感,在（zài）含有三氟胸苷的選擇（zé）性培養液中能繼續分裂並形成集落。相似的,次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸（suān）核糖基酶(HPRT)正常（cháng）的細胞（bāo）對 6-硫代（dài）鳥嘌呤（6-thioguanine,6-TG）敏感,突變的細胞（bāo）則不敏感,在含（hán）有 6-硫代鳥（niǎo）嘌（piào）呤的選擇性培養液（yè）中可生長形成集落（luò）。基於突（tū）變集落（luò）數,計算突（tū）變頻率以評價受試物的致（zhì）突變性。

應用範圍

應用於科研、農業（yè）、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領（lǐng）域

符（fú）合標準：

GB/T 15670.20-2017《農藥登（dēng）記毒理學試驗方法第20部分（fèn）:體外哺乳動物細（xì）胞（bāo）基因突變試驗》

二、試驗流程（chéng）

1）細胞培養（yǎng）:

選擇合適細胞係（如L5178Y、CHO），常規傳代（dài）培養

2）受試物處理:

暴露於不同濃（nóng）度受試物（需設陰性/陽性對照）

3）表達期:

預留足夠（gòu）時間（通常7-10天）使突變表型顯現。

4.）突（tū）變體篩選（xuǎn）:

TK試驗:使用三氟胸苷（TFT）篩選TK突變體。

HPRT試驗（yàn）:使（shǐ）用6-硫代鳥嘌呤（6-TG）選HPRT突變（biàn）體。

5）克隆形成分析:

計數突變集落，計算突變頻率（突變集落數/存活細（xì）胞數）

6）數據統計（jì）:

與對照組比較，判斷突變（biàn）率是否顯著增加。

三、注意事項

1）細（xì）胞活力控製:受試物濃度需（xū）保證細胞存活率（通常>50%）

2）代謝活化係統:需加入S9混合物(模擬體內代謝，（如Aroclor 1254誘導的大鼠肝S9）。

3）假陽性/陰性:避免pH、滲透壓等非特異性因素幹擾。

4）合規性:   遵循國際指南（如OECD 490、ICH S2R1）。

計算：